A repetitive probe for FISH analysis of bovine interphase nuclei

Wafa SLIMANE; Daniel VAIMAN; Sophie GODARD; Anne VAIMAN; Edmond CRIBIU; Jean-Paul RENARD

doi:doi:10.1051/gse:2000115

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Volume 32 / No 2 (March-April 2000)

Genet. Sel. Evol., 32 2 (2000) 217-225

Abstract

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Issue		Genet. Sel. Evol. Volume 32, Number 2, March-April 2000


Page(s)		217 - 225
DOI		https://doi.org/10.1051/gse:2000115

DOI: 10.1051/gse:2000115

Genet. Sel. Evol. 32 (2000) 217-225

A repetitive probe for FISH analysis of bovine interphase nuclei

Wafa SLIMANE^a,b - Daniel VAIMAN^c - Sophie GODARD^c - Anne VAIMAN^c - Edmond CRIBIU^c - Jean-Paul RENARD^a

^aUnité biologie du développement, Institut national de la recherche agronomique, 78352 Jouy-en-Josas Cedex, France
^bServices techniques de l'Union national des coopératives d'élevage et d'insémination artificielle, 13, rue Jouët, BP 65, 94703 Maisons-Alfort, France
^cGénétique biochimique et cytogénétique, Institut national de la recherche agronomique, 78352 Jouy-en-Josas Cedex France

(Received 22 June 1999; accepted 20 December 1999)

Abstract:

The purpose of this study was to generate repetitive DNA sequence probes for the analysis of interphase nuclei by fluorescent in situ hybridisation (FISH). Such probes are useful for the diagnosis of chromosomal abnormalities in bovine preimplanted embryos. Of the seven probes (E1A, E4A, Ba, H1A, W18, W22, W5) that were generated and partially sequenced, five corresponded to previously described Bos taurus repetitive DNA (E1A, E4A, Ba, W18, W5), one probe (W22) shared no homology with other DNA sequences and one (H1A) displayed a significant homology with Rattus norvegicus mRNA for secretin receptor transmembrane domain 3. Fluorescent in situ hybridisation was performed on metaphase bovine fibroblast cells and showed that five of the seven probes hybridised most centromeres (E1A, E4A, Ba, W18, W22), one labelled the arms of all chromosomes (W5) and the H1A probe was specific to three chromosomes (ch14, ch20, and ch25). Moreover, FISH with H1A resulted in interpretable signals on interphase nuclei in 88% of the cases, while the other probes yielded only dispersed overlapping signals.

Keywords: satellite DNA / FISH / bovine / centromere

Résumé:

Génération d'une sonde bovine à séquences répétées pour l'analyse en FISH des noyaux bovins en interphase. L'objectif de cette étude est d'isoler des sondes nucléiques bovines spécifiques d'un faible nombre de chromosomes permettant une analyse par hybridation in situ fluorescente (FISH) des noyaux en interphase. De telles sondes présentent un outil précieux pour l'étude d'anomalies chromosomiques d'embryons chez les bovins. Sept sondes ont été générées (E1A, E4A, Ba, H1A, W18, W22, W5) et partiellement séquencées : cinq d'entre elles correspondent à des séquences répétées d'ADN génomique bovin déjà décrites (E1A, E4A, Ba, W18, W5), la sonde W22 ne présente à ce jour aucune homologie avec les séquences connues dans ``Genbank'' et la dernière, H1A (3,5 kb isolée après digestion par l'enzyme HindIII) présente une homologie significative sur 158 paires de base avec l'ARNm codant pour le 3 $^{\rm e}$ domaine transmembranaire du récepteur de la secrétine de rat (Rattus norvegicus). L'hybridation in situ fluorescente sur des fibroblastes bovins en métaphase a montré que cinq sondes (E1A, E4A, Ba, W18, W22) hybrident la plupart des centromères, que la sonde W5 marque les bras de tous les chromosomes, et que la sonde H1A est spécifique de trois chromosomes bovins (ch14, ch20 et ch25). De plus, sur noyaux interphasiques, l'utilisation de H1A a permis d'obtenir des signaux interprétables dans 88 % des cas, contrairement aux autres sondes qui donnent des signaux superposés difficiles à interpréter.

Mots clé : ADN satellite / FISH / bovin / centromère

Correspondence and reprints: Jean-Paul Renard
renard@biotec.jouy.inra.fr

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